其一，在c8反相液相色譜柱上有很多填料，包括聚合物，聚合物表面涂上硅膠和氧化鋁，無機－有機混合物，涂層氧化鋯和石墨化碳都存在于這些鍵合硅膠上；
為增加c8反相液相色譜柱的應用，常利用各種流動相和添加物作用于反相色譜柱，添加物可以改變或修飾填料的表面，有時候還有可能會污染鍵合相表面；
硅膠表面的疏水鍵合相是硅烷醇，殘留的硅烷醇存在于所有的硅膠鍵合填料中，這些硅烷醇具有弱酸性，因此能與某些待分析物反應成為基質成分。
其二，樣品中含有的鹽、脂質、含脂物質、腐質酸、疏水蛋白質和其它一些物質是一些可能在使用時與HPLC柱發生相互作用的物質。部分非常疏水的樣品基質，如：玉米油，高芳香物質和蠟能粘住固定相裝填表面并且改變其性質；
含有蛋白質物質的生物流體也能吸附在填料表面。有些物質有比待測物或少或大的保留值，那些保留值較小的物質如鹽類一般來說在空體積時就被沖出色譜柱，這些非目標產物的干擾能被檢測器檢測到而且能形成色譜峰，氣泡，基線上移或者是負峰。如果樣品成分在柱子中有很強的保留而且流動相溶液成分不足以把這些物質洗脫下來，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質通常就會積累在柱頭。這些行為通常只有通過平行實驗才能發現。有著中等保留值的樣品能被緩慢洗出而且表現為寬峰，基線擾動，或者基線漂移。
