共創共贏
59種植物生長調節劑殘留量測定法
HPLC-MS/MS法
參考標準《植物生長調節劑殘留量測定法
國家藥品標準草案公示稿 第一法》
2024年7月26日，國家藥典委(shouci發布)公示了植物生長調節劑殘留量測定法國家藥品標準草案。
本次草案用液相色譜-串聯質譜法測定藥材及飲片或制劑中部分植物生長調節劑殘留量，主要涉及59種植物生長調節劑、9種水溶性植物生長調節劑及乙烯利殘留量的檢測。該標準選擇了我國食品、中藥種植中使用較多和檢出率較高的植物調節劑品種。同時，參考國內外的食品標準法規，選擇了我國食品安全國家標準、國際食品法典中規定的有最大殘留xianliang的品種，以及農業部登記的品種，共完成69種植調劑品種的測定方法研究；在代表性樣品的選擇上，兼顧不同藥用部位及干擾成分，以提高方法的通用性。
迪馬科技根據公示內容，參考《植物生長調節劑殘留量測定法國家藥品標準草案公示稿》《植物生長調節劑殘留量測定法 第一法 59 種植物生長調節劑殘留量測定法》，重現了此方案，使用HPLC-MS/MS法，乙腈提取，外標法定量，NavigatorsilTM C18，150x3.0mm，2.7μm (Cat.#: 88005) 色譜柱分析了人參、枸杞樣品中的59種植物生長調節劑，除草案中標注"*"的待測組分，其他組分加標回收率在60%-120%范圍內，符合標準草案規定。
本方案適用于人參、枸杞中59種植物生長調節劑的檢測。
(1) 59種植物生長調節劑混合標準儲備液: 50μg/mL溶于乙腈1mL，迪馬標準品部提供 (Cat.#:48409);
(2) 混合標準中間液: 準確吸取1mL混合標準儲備液，乙腈定容至10mL，配制成終濃度5μg/mL的混合標準溶液；
(3) 混合標準工作液: 吸取適量混合標準中間液，用乙腈稀釋至終濃度100ng/mL。
取供試品，粉碎成粉末(過三號篩)，取約3g，精密稱定，置50mL聚苯乙烯具塞離心管中，精密加水 10mL，渦旋使藥粉充分浸潤，放置30分鐘，精密加入乙腈15mL，渦旋使混勻，置振蕩器上劇烈振蕩(每分鐘500次)5分鐘，加入無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸三鈉和檸檬酸氫二鈉的混合粉末(4:1:1:0.5) 6.5g(Cat.#: 64521s)，立即搖散，再置振蕩器上劇烈振蕩(每分鐘500次)3分鐘，于冰浴中冷卻10分鐘，離心(每分鐘4000轉)5分鐘，待凈化。
精密吸取上清液9mL，置已預先裝有凈化材料的分散固相萃取凈化管 [無水硫酸鎂900mg、十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)450mg和硅膠(Silica)100mg (Cat.#:64745)；枸杞樣品，額外加入石墨化炭(Carb) 45mg (Cat.#: 64744)]中，渦旋使充分混勻，再置振蕩器上劇烈振蕩(每分鐘500次)5分鐘使凈化wanquan，離心(每分鐘4000轉)5分鐘，精密吸取上清液5mL，置氮吹儀上于40℃水浴濃縮至約0.4mL，加乙腈稀釋至1mL，渦旋混勻，用0.22μm Nylon濾膜(Cat.#: 37177)濾過，取續濾液，即得。
備注:同方法制備基質匹配標準溶液。
(1) UPLC條件
色譜柱: NavigatorsilTM C18，150x3.0mm，2.7μm(Cat.#: 88005)
流速: 0.4mL/min
進樣量: 10μL
柱溫: 35℃
流動相: A: 0.05%甲酸溶液(含10mmol/L甲酸銨) B: 0.05%甲酸甲醇(含10mmol/L甲酸銨)
梯度設置:
(2) 質譜條件
電離模式: ESI
掃描方式: 正/負離子掃描
檢測方式: 多反應監測
電噴霧電壓: 4200/-4500V
霧化氣壓力: 50psi
輔助氣壓力: 50psi
氣簾氣壓力: 20psi
離子源溫度: 500℃
(1) 人參
(2) 使用標準加入法測定人參樣品中加標回收小于60%的組分
取適量標準中間液，同供試品溶液制備的處理方法 ，制備添加水平10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg、100μg/kg和200μg/kg的系列混合對照品工作液，校正以下幾種待測組分。
(3) 枸杞
(4)使用標準加入法測定枸杞樣品中加標回收小于60%的組分
取適量標準中間液，同供試品溶液制備的處理方法，制備添加水平10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg、100μg/kg和200μg/kg的系列混合對照品工作液，校正以下幾種待測組分。
注意事項:
1、加標水平100μg/kg的樣品，部分待測組分添加回收率超出了規定范圍60%-130%。其中，人參樣品: 矮壯素回收率15.80%、甲哌鎓回收率26.58%、吡啶醇回收率17.50%、反式玉米素回收率21.70%；
枸杞樣品: 矮壯素回收率32.06%、糠氨基嘌呤回收率49.42%、甲哌鎓回收率25.20%、烯腺嘌呤回收率37.38%、吡啶醇回收率27.86%、反式玉米素回收率20.02%、6-芐氨基嘌呤回收率49.98%。
2、使用標準加入法測定以上幾種待測組分，加標回收率可以達到80%-120%，在標準草案規定范圍內。
3、以人參樣品加標回收為例，分析了7種回收率異常待測組分的主要影響因素:
① 矮壯素: 30%硅膠吸附損失以及提取損失；
② 糠氨基嘌呤: C18填料吸附損失；
③ 甲哌鎓: 47%硅膠吸附損失以及提取損失；
④ 烯腺嘌呤: C18吸附損失和10%硅膠吸附損失；
⑤ 吡啶醇: 提取損失高達60％以上，硅膠吸附損失約25%；
⑥ 反式玉米素: C18吸附損失約45％；
⑦ 6-芐氨基嘌呤: C18吸附損失約40％。
4、如果加入石墨化炭黑，對大多數待測組分均有不同程度的吸附?？蛻艨蓞⒖家陨弦幝蓛灮崛》椒ê蛢艋椒ā?/span>
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