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蜂產品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測定
參考GB 31657.8-2025 《食品安全國家標準 蜂產品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》
雙甲脒是一種常用于畜牧業和農業的廣譜殺蟲劑，通過干擾蟲類神經遞質的代謝達到防治病蟲的效果，蜂產品中使用可以達到防治蜂螨的效果。雙甲脒化學性質不穩定，在生物體內易代謝成具有致癌性的2,4-二 jia ji ben an，對人體健康造成威脅。GB 31650-2019《食品安全國家標準 食品中獸藥zui da 殘留can liu 》規定牛、羊、豬及蜂蜜中的xian liang為0.4mg/kg, 并將雙甲脒及其代謝產物 2,4-二 jia ji ben an的總和作為殘留標志物。
GB 31657.8-2025 《食品安全國家標準 蜂產品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》是由中華人民共和國nong ye nong cun 部 、guo jia 衛生健康委員會和國家市場jian du guan 理總局三大部委聯合發布的重要技術標準。該標準已于2025年6月3日發布，并定于2025年9月1日起正式實施。本方法使用液相色譜串聯質譜進行測定，具有更高的靈敏度和更低的檢出限。
迪馬科技參考GB 31657.8-2025重現了此方法，使用磷酸二氫鉀緩沖液溶解樣品，乙腈提取，使用我司色譜柱Leapsil® C18，100x4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)進行測定，基質匹配標準溶液進行計算，添加水平為5μg/kg的蜂蜜樣品加標回收率可做到雙甲脒51%-63%，2,4-二 jia ji ben an 80%-86%；添加水平為10μg/kg的蜂王漿樣品加標回收率可做到雙甲脒60%-72%，2,4-二 jia ji ben an 65%-73%。
經過大量實驗測試，原方法重現性較差，且回收率偏低。我司對緩沖鹽的使用進行了優化，使用弱堿性的磷酸氫二鉀緩沖液代替磷酸二氫鉀后，減弱了前處理過程中雙甲脒的代謝速率，降低了由于大量代謝中間產物反應不che di造成的回收率損失，有利于實驗結果的重現，更容易達到標準中批內樣品相對標準偏差≤20%的要求。使用0.2mol/L磷酸氫二鉀作為緩沖液后，回收率普遍提升了30%左右，大大降低了假陰性風險，增加了定量分析的準確性。
由于原方法做蜂王漿樣品有強基質效應，我司增加了凈化步驟，經過大量實驗，使用我司ProElut® PMR 150mg/3mL(Cat.#: 65996)對樣品提取液凈化后，對目標物不產生吸附的同時，蜂王漿樣品可由強基質效應降低為中等基質效應，減少了樣品對離子源的污染并增加了儀器使用壽命，該凈化方法簡單、快捷，客戶可根據實際需求選擇使用。
本方案適用蜂蜜和蜂王漿雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an的測定。
(1) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準儲備液：由迪馬科技標準品部提供(Cat.#: 48872)，濃度為100μg/mL溶于乙腈。
(2) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅰ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準儲備液，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅰ，濃度為5.0μg/mL。
(3) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅱ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅰ，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅱ，濃度為125ng/mL。
(4) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅲ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準儲備液，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅲ，濃度為1.0μg/mL。
(5) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅳ：準確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標準中間液Ⅲ，用50%乙腈水配制成標準中間液Ⅳ，濃度為25ng/mL。
蜂蜜：
(1) 稱取5g樣品于50mL塑料離心管中；
(2) 向離心管中加入5mL 0.2mol/L磷酸氫二鉀溶液；
(3) 向離心管中加入5mL乙腈，振蕩5min；
(4) 向離心管中加入5g氯化鈉和5g無水硫酸鎂，立即搖勻，振蕩5min；
(5) 冷水浴5min；
(6) 8000rmp離心5min；
(7) 移取上清液至另一個離心管中待凈化。
蜂王漿：
(1) 稱取2g樣品于50mL塑料離心管中；
(2) 向離心管中加入2mL 0.2mol/L磷酸氫二鉀溶液；
(3) 向離心管中加入10mL乙腈，振蕩5min；
(4) 向離心管中加入3g氯化鈉和3g無水硫酸鎂，立即搖勻，振蕩5min；
(5) 冷水浴5min；
(6) 8000rmp離心5min；
(7) 移取上清液至另一個離心管中待凈化。
ProElut® PMR 150mg/3mL (Cat.#: 65996)
樣品：準確吸取2mL待凈化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃進樣瓶(Cat.#: 1033)，加入0.5mL水，混勻，經0.22μm PTFE濾膜過濾(Cat.#: 37178)，待測定。
基質匹配混合標準工作液： 準確吸取2mL空白樣品待凈化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃進樣瓶(Cat.#: 1033)，加入適量標準中間液，用水定容至1mL，混勻，經0.22μm PTFE濾膜過濾(Cat.#: 37178)，待測定。
UPLC條件
色譜柱：Leapsil® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)
流速：0.3mL/min
進樣量：10μL
柱溫：35℃
流動相：A:0.1%甲酸水溶液 B:甲醇
質譜條件
電離模式: ESI
掃描方式: 正離子掃描
檢測方式: 多反應監測
電噴霧電壓: 4500V
霧化氣壓力: 50psi
輔助氣壓力: 50psi
氣簾氣壓力: 20psi
離子源溫度: 500℃
1. 液相條件為反向條件下，2,4-二 jia ji ben an 在普通C18色譜柱上保留很弱，在50%乙腈水的溶劑條件下，洗脫能力太強，容易有溶劑效應，經過測試，使用我司色譜柱Leapsil® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)進行實驗，對目標物有較好的保留，并且能消除溶劑效應。
2. 蜂王漿樣品除了比蜂蜜樣品有更強的基質影響，在進樣過程中，還有更快的代謝速率。代謝速率測定實驗結果顯示，蜂王漿在等待進樣過程中，每過1小時，就會產生2%的代謝物，蜂蜜產生0.5%的代謝物，建議自動進樣器設置低溫，降低雙甲脒代謝速率。
3. 本方法在原方法基礎上進行了優化，使用磷酸氫二鉀替換了磷酸二氫鉀，降低了代謝中間產物的不穩定性，提升了回收率，加標回收結果的重現性更好。
4. ProElut® PMR凈化小柱對樣品中的脂類有很強的選擇性吸附，同時不吸附目標物。兩種添加水平的蜂王漿樣品的基質效應從24.8%、16.4%分別提升到55.6%、40.4%，除了降低基質效應的效果非常明顯，上樣后，小柱上也殘留有色雜質，見下圖：
下載方案