共創共贏
食品中合成著色劑的測定
參考GB 5009.35-2023標準
合成著色劑
合成著色劑具有著色力強、色澤鮮艷、不易褪色、成本低等優點，主要作用是改善食品的感官性狀，增加食品的色澤，促進食欲。不法廠家為了使飲品、糕點、醬鹵制品呈現誘人的色澤，違規使用人工合成著色劑。長期或一次性大量食用色素含量超標的食品，可能會引起過敏、腹瀉等癥狀，當攝入量過大，超過肝臟負荷時，會在體內蓄積，對腎臟、肝臟產生一定的傷害。GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》中收載的合成著色劑有11種，分別為檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、喹啉黃、赤蘚紅和酸性紅，并對其允許使用的食品類型和使用限量做出了明確規定。
方法優勢
迪馬科技參考《GB 5009.35-2023 食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》，建立了食品中合成著色劑的測定方法，采用ProElut® PWA-2固相萃取柱凈化，HPLC-PDA檢測。該方法具有提取方法簡單、回收率高、凈化效果優異、方法穩定性好等特點。
注意事項：
1、關于色譜條件，不同色譜儀器由于死體積不同，采用Diamonsil® C18(2)色譜柱時，可使用標準原方法梯度程序，也可以適當延長流動相初始比例時間（如本文所示）,以增加檸檬黃和新紅分離度。另外，標準中采用甲醇作為有機相，也可使用乙腈，分離度更好、基線更加平穩，具體方法可致電質詢
2、提取液濃縮時間控制在40-50min之間，不宜過長，以免造成回收率損失。
3、洗脫液氮吹到0.5mL，剩余液體不宜過少，以避免氮吹影響，同時剩余液體也可減少濾膜過濾對化合物吸附。
4、樣品凈化濃縮，定容后的液體，用0.45μm親水PTFE濾膜過濾（Cat.#:30109），過濾時需要棄去5滴初濾液，樣品液體初期接觸濾膜，目標物在濾膜上少量吸附，待濾膜吸附目標物飽和后，取續濾液上機分析。
1、適用范圍
本方案適用于果粒橙、葡萄酒、綠豆糕、帶餡兒面包、棒棒糖、話梅、果凍、火腿、醬牛肉等食品中檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、喹啉黃、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍和赤蘚紅11種合成著色劑的測定。
2、標準品配制
(1) 單標儲備液1000μg/mL：稱取適量合成著色劑單標，用水配制成1000μg/mL的單標儲備液。
(2) 混標中間液50μg/mL：分別吸取0.5mL單標儲備液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成50μg/mL的混標中間液。
(3) 混標中間液10μg/mL：分別吸取0.1mL單標儲備液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成10μg/mL的混標中間液。
3、提取
3.1 液體類試樣（果粒橙、葡萄酒）
(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中，加入25mL乙醇氨水溶液，振蕩1min，5000rpm下離心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，并用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液；
(2) 準確吸取10mL提取液，50℃水浴下氮氣吹至3mL，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，待凈化。
3.2 固體類試樣（綠豆糕、帶餡兒面包、棒棒糖、話梅、果凍）
(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中，加入2mL水，50℃水浴加熱混勻樣品，加入25mL乙醇氨水溶液，振蕩1min，50℃水浴超聲提取20min，8000rpm下離心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；
(2) 向下層殘留物中加入10mL乙醇氨水溶液，按照步驟(1)重復提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL；
(3) 準確吸取10mL提取液，50℃水浴下氮氣吹至3mL，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，待凈化。
3.3 含油量較大的試樣（火腿、醬牛肉）
(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中，加入20mL石油醚，振蕩1min，超聲提取10min，8000rpm離心5min，棄去上清液，加入25mL乙醇氨水溶液，振蕩1min，50℃水浴超聲提取20min，8000rpm下離心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；
(2) 向下層殘留物中加入10mL乙醇氨水溶液，按照步驟(1)重復提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL；
(3) 準確吸取10mL提取液，50℃水浴下氮氣吹至3mL，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，待凈化。
乙醇氨水溶液：700mL無水乙醇，4mL氨水，用水定容至1000mL。
提取液濃縮時間控制在40-50min之間，不宜過長。
4、凈化
ProElut® PWA-2 150mg/6mL（Cat.#:65815）
(1)活化：依次加入6mL甲醇、6mL水，流出液棄去；
(2)上樣：將待凈化液加入柱中，控制流速2s/滴，棄去流出液；
(3)淋洗：依次加入6mL 2%甲酸水溶液、6mL甲醇，控制流速約2s/滴，棄去淋洗液，真空抽干2min(或不抽干)；
(4)洗脫：分兩次加入6mL 2%氨水甲醇溶液，每次3mL，控制流速約3s/滴，收集洗脫液；
(5)重新溶解：將洗脫液在50℃水浴下氮氣吹至約0.5mL，用乙酸銨(20mM,pH9.0)定容至2mL，渦旋混勻，用0.45μm親水PTFE濾膜過濾，棄去5滴初濾液，取續濾液上機分析。
5、分析條件
儀器：LC-2040C
色譜柱：Diamonsil® C18(2) 250×4.6mm，5μm（Cat.#：99603）
流速：1.0mL/min
進樣量：10μL
柱溫：30℃
檢測器：PDA 400-800nm
流動相：A:甲醇 B:0.02mol/L 乙酸銨溶液
梯度設置
6、添加回收結果
食品中人工合成著色劑的HPLC檢測的添加回收結果。
添加濃度30mg/kg(加標量:50μg/mL,1.2mL)
添加濃度1.5mg/kg(加標量:10μg/mL,0.3mL)
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